60 / 350
59
Βιολογία Θετικών Σπουδών – Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ
Η μία βρίσκεται στο 5’ άκρο και η άλλη στο 3’ άκρο. Οι αλληλουχίες αυτές
ονομάζονται 5’ και 3’ αμετάφραστες περιοχές, αντίστοιχα.
Συνεπώς, η αλληλουχία του ώριμου mRNA θα είναι:
ώριμο mRNA:
5’ GAAUUC
AUGUUUGUUUAA
GAAUUC 3’ .
Οι διαδικασίες κατά την πορεία από το γονίδιο στο πεπτίδιο είναι η μεταγραφή, η
ωρίμανση και η μετάφραση.
Η μεταγραφή γενικά σ’ ένα ευκαρυωτικό κύτταρο, πραγματοποιείται στον
πυρήνα, στα μιτοχόνδρια και στους χλωροπλάστες, ενώ η μετάφραση στα
ριβοσώματα του κυτταροπλάσματος και στα ριβοσώματα των μιτοχονδρίων και
των χλωροπλαστών. Στη συγκεκριμένη περίπτωση, εφόσον το γονίδιο είναι
ασυνεχές ή διακεκομμένο (αφού έχει εσώνιο), προέρχεται από τον πυρήνα (το
μιτοχονδριακό και το χλωροπλαστικό DNA δεν έχουν εσώνια). Άρα, η διαδικασία
της μεταγραφής και της ωρίμανσης του πρόδομου mRNA γίνεται στον πυρήνα,
ενώ η διαδικασία της μετάφρασης στα ριβοσώματα του κυτταροπλάσματος.
Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες παράγονται από βακτήρια και ο φυσιολογικός
τους ρόλος είναι να τα προστατεύουν από την εισβολή «ξένου» DNA. Οι
περιοριστικές ενδονουκλεάσες αναγνωρίζουν ειδικές αλληλουχίες 4-8
νουκλεοτιδίων στο δίκλωνο DNA. Μία από τις περιοριστικές ενδονουκλεάσες που
χρησιμοποιείται ευρέως είναι η EcoRI που απομονώθηκε από το βακτήριο
Escherichia coli.
Το ένζυμο αυτό όποτε συναντά την αλληλουχία
5'-G Α Α Τ Τ C-3'
3'-C Τ Τ A A G-5'
στο γονιδίωμα, κόβει κάθε αλυσίδα μεταξύ του G & του Α (
με κατεύθυνση 5'
®
3'
)
αφήνοντας μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες βάσεις στα κομμένα άκρα.
Οι θέσεις αναγνώρισης της EcoRI στο μόριο DNA είναι οι ακόλουθες:
5’ GAATTCATGTTTCCCCAGGTTTAAGAATTC 3’
3΄CTTAAGTACAAAGGGGTCCAAATTCTTAAG 5΄
Τα τμήματα που προκύπτουν μετά την επίδραση με την EcoRI είναι τα ακόλουθα:
Θραύσμα 1
ο
Θραύσμα 2
ο
Θραύσμα 3
ο
5΄ G 3΄ 5΄ AATTCATGTTTCCCCAGGTTTAAG 3΄ 5΄AATTC 3΄
3΄ CTTAA 5΄ 3΄ GTACAAAGGGGTCCAAATTCTTAA 5΄ 3΄ G 5΄
Προφανώς το τμήμα που θα εισάγουμε στο φορέα κλωνοποίησης είναι το μεσαίο
(2
ο
Θραύσμα).