304 / 350
303
Βιολογία Θετικών Σπουδών –
Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ
Το ανθρώπινο γονίδιο που εξετάζουμε κόπηκε με την περιοριστική
ενδονουκλεάση δ και δημιουργήθηκαν μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες
βάσεις στα κομμένα άκρα. Με την ίδια περιοριστική ενδονουκλεάση δ κόπηκε
και το αντίστοιχο πλασμίδιο. Κατά την επώαση του γονιδίου με το πλασμίδιο
είναι δυνατόν το γονίδιο να ενσωματωθεί με δύο πιθανούς τρόπους:
i)
με τέτοιο προσανατολισμό ώστε το κωδικόνιο έναρξης της κωδικής
αλυσίδας 5’
ATG
3’ να βρίσκεται κοντά στον υποκινητή του γονιδίου και
το κωδικόνιο λήξης 5’ ΤΑΑ3’ κοντά στις αλληλουχίες λήξης της
μεταγραφής. Σ’αυτήν
την περίπτωση το γονίδιο εκφράζεται κανονικά και
οι βακτηριακοί αυτοί κλωνοι παράγουν το ολιγοπεπτίδιο.
ii)
με αντίστροφο από τον παραπάνω προσανατολισμό δηλαδή
δεν υπάρχει
πια (λόγω προσανατολισμού) κωδικόνιο έναρξης κοντά στον
υποκινητή.Σ΄αυτήν την περίπτωση το γονίδιο δεν εκφράζεται και οι
βακτηριακοί κλώνοι παρά του ότι διαθέτουν ανασυνδυασμένο πλασμίδιο
δεν παράγουν το ολιγοπεπτίδιο.
3’..TAC…..ATT..5’
5’..ATG….TAA..3’
Υποκινητής
Αλληλουχίες λήξης.
3’..AAT….GTA..5’
5’..
T
TA….CAT..3’
Υποκινητής
Αλληλουχίες λήξης.