Βιολογία Θετικών Σπουδών Γ' Λυκείου

Βιολογία Θετικών Σπουδών – Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ

(Μονάδες 8)

β.

Βάσει ποιών παρατηρήσεων έγινε η διάγνωση;

(Μονάδες 3)

Απάντηση:

Το ένζυμο EcoRI όποτε συναντά την αλληλουχία:

5'-G Α Α Τ Τ C-3'

3'-C Τ Τ A A G-5' στο

γονιδίωμα, κόβει κάθε αλυσίδα μεταξύ του G και του Α (με κατεύθυνση 5'→3')

αφήνοντας μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες βάσεις στα κομμένα άκρα. Τα

άκρα αυτά μπορούν να σχηματίσουν δεσμούς υδρογόνου με τις

συμπληρωματικές βάσεις άλλων κομματιών DNA που έχουν κοπεί με το ίδιο

ένζυμο.

Οι θέσεις αναγνώρισης της EcoRI στο μόριο DNA είναι:

5΄ GAATTCTTAATGCΑAGATCATAAAGAATTCTAG 3΄

3΄ CTTAAGAATTACGΤTCTAGTATTTCTTAAGATC 5΄

Μετά την επίδραση με την EcoRI προκύπτουν τα ακόλουθα θραύσματα:

Θραύσμα 1

Θραύσμα 2

Θραύσμα 3

5΄ G 3΄ 5΄AATTCTTAATGCΑAGATCATAAAG 3΄ 5΄AATTCTAG 3΄

3΄ CTTAA 5΄ 3΄ GAATTACGΤTCTAGTATTTCTTAA 5΄ 3΄ GATC 5΄

Προφανώς το θραύσμα που θα εισάγουμε στο φορέα κλωνοποίησης είναι το

μεσαίο (2

Θραύσμα).

Με το ίδιο ένζυμο περιορισμού κόβουμε και το φορέα κλωνοποίησης, δηλαδή

το πλασμίδιο.

Τα δύο είδη DNA, του πλασμιδίου και του προκαρυωτικού κυττάρου,

αναμιγνύονται και επειδή έχουν συμπληρωματικά (μονόκλωνα) άκρα,