337 / 350
336
Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ – Βιολογία Θετικών Σπουδών
Απάντηση
Δ1.
Περιοριστική ενδονουκλεάση
E1
:
5΄
GTCGAC
3΄
3΄
CAGCTG
5΄
Περιοριστική ενδονουκλεάση
E3
:
5΄
CAATTG
3΄
3΄
GTTAAC
5΄
Δ2.
Στο
cDNA
του γονιδίου Χ δεν υπάρχουν: 1) ο υποκινητής και 3) τα εσώνια
Δ3.
Ο υποκινητής είναι ειδική περιοχή του
DNA,
που βρίσκεται πάντα πριν το
γονίδιο, πάνω στην οποία προσδένεται η
RNA
πολυμεράση με τη βοήθεια των
μεταγραφικών παραγόντων, προκειμένου να ξεκινήσει η διαδικασία της
μεταγραφής. Η μεταγραφή έχει προσανατολισμό 5'→3' όπως και η αντιγραφή.
Η σύνθεση του RNA
σταματά στο τέλος του γονιδίου, όπου ειδικές
αλληλουχίες οι οποίες ονομάζονται αλληλουχίες ληξης της μεταγραφής
,
επιτρέπουν την απελευθέρωσή του.
Επομένως, προκειμένου να μεταγραφεί το δίκλωνο μόριο
cDNA
του γονιδίου Χ
μέσα στο πλασμίδιο, θα πρέπει να εισαχθεί σε αυτό με κατάλληλο τρόπο και
πιο συγκεκριμένα θα πρέπει να εισαχθεί όπως το παρατηρούμε στην εικόνα 2
και όχι ανεστραμμένο. Έτσι το αριστερό άκρο του θα κόβεται με την
περιοριστική ενδονουκλεάση Ε1 και το δεξί άκρο με την περιοριστική
ενδονουκλεάση
Ε3. Για να μπορέσει να εισαχθεί το μόριο αυτό μέσα στο
πλασμίδιο, θα πρέπει να δημιουργηθούν στο πλασμίδιο μονόκλωνα
συμπληρωματικά άκρα από αζευγάρωτες βάσεις στα κομμένα άκρα. Στη
συνέχεια τα δύο είδη DNA, του πλασμιδίου και του δίκλωνου
cDNA ,
αναμιγνύονται και, επειδή έχουν συμπληρωματικά άκρα, ενώνονται μεταξύ
τους με τη μεσολάβηση ενός ενζύμου, της DNA δεσμάσης.
Προκειμένου να
δημιουργηθούν στο πλασμίδιο μονόκλωνα συμπληρωματικά άκρα με τα άκρα
του δίκλωνου μορίου
cDNA
, θα πρέπει να κοπεί με τις περιοριστικές
ενδονουκλεάσες Ε4 και Ε2. Το πλασμίδιο θα έχει την ακόλουθη μορφή:
5
’
C AATTC 3
’
3
’ GAGCT
G 5
’
Υποκινητής